PCR为主的核酸扩增技术成为当前呼吸道病原体核酸检测最普遍的核酸诊断方法

儿童呼吸道感染的病原复杂多样，包括病毒、细菌、非典型病原体、真菌等。明确感染病原有助于抗微生物药物的合理使用及呼吸道传染病的早发现、早隔离、早报告和早治疗。因此，快速准确的病原学诊断对于呼吸道常见感染性疾病的临床诊疗及防控具有重要意义。

儿童呼吸道感染病原体检测方法包括分离培养、抗原检测、核酸检测和抗体检测等，各种方法均有各自的优缺点。由于病原体分离培养费时费力且敏感性较低，血清抗体检测因有窗口期不推荐使用，故呼吸道感染病原体的主要实验室诊断方法为抗原检测和核酸检测。病原体核酸检测方法按照技术原理又可分为核酸扩增、核酸杂交、基因测序、规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)技术等。核酸扩增包括PCR扩增、等温扩增技术等。

二、常见病原体类型

三、标本类型选择及转运

四、适用检测人群
1、门诊患儿

• 急性上呼吸道感染患儿，一般不常规进行呼吸道病原体的核酸检测，但对于有特异性抗病毒药物的病毒感染，如流感病毒，可视条件或在其他检测方法不能明确诊断时，使用核酸检测，有利于抗病毒药物的合理应用。
• 急性下呼吸道感染患儿，或有心肺等重要脏器的基础疾病、免疫功能异常的急性呼吸道感染患儿，建议根据患儿年龄、临床特征和发病季节等及时选用可疑病原的核酸检测方法进行病原学确定，尽快明确病原体，有助于患儿治疗方案的确定和后续管理。

2、急诊及住院患儿

• 对有急诊适应证及所有因急性呼吸道感染性疾病住院、住院期间新出现呼吸道感染症状(伴或不伴发热)、或出现不明原因的呼吸窘迫、慢性心肺疾病急性恶化、血液病、肿瘤患儿出现中性粒细胞减少/缺乏伴发热的。
• 有急性呼吸道感染的危重症患儿，建议首选多重核酸检测。若常规核酸检测不能明确病原，推荐采用mNGS进行病原学检测，但其结果需要结合临床表现综合分析，必要时使用其他方法进一步验证。

五、儿童急性呼吸道感染病毒病原检测结果分析

1、不同实验室诊断方法各具优缺点

• 目前，主要是抗原检测和核酸检测。抗原检测的敏感度低，但阳性结果有病因学意义；核酸检测敏感度高，阳性结果要具体分析，不一定有病因学意义。

2、根据感染进程、不同的病毒选择不同类型标本

• 对于Flu这类以上呼吸道感染为主的病毒，鼻(咽)拭子标本基本可满足临床检测需求。
• 下呼吸道感染为主的病毒在感染上呼吸道上皮细胞1~3 d后迅速扩散至下呼吸道。
• 对于RSV、HAdV、PIV、SARS-CoV-2等多数能够引起下呼吸道感染的呼吸道病毒而言，鼻咽分泌物、鼻咽拭子、肺泡灌洗液等标本类型更为适合。
• 在病毒载量未达到抗原检测阈值的病程极早期(如流感样病例发热1~2 h)或者病程后期，选择抗原检测，可能就会得到阴性结果。因此，在这2个阶段，最好选用核酸检测。在疾病恢复期，核酸检测也可能转为阴性，此时可考虑抗体检测，最好是双份血清检测。

3、多重呼吸道病毒检测阳性(MRVD)时结合临床分析

• 因为核酸检测的高灵敏度，在部分无症状感染者中也可检测到病毒。
• 一份标本中检测到多种病毒的情况很常见，但不是所有检测到的病毒与现症感染均相关。
• 大量研究表明，MRVD在下呼吸道感染儿童中为20%~40%，但这一现象在成人中不太常见。在许多研究中，人博卡病毒与人鼻病毒是最常见的MRVD 。
• 核酸检测阳性不一定反映病毒活跃复制，但相对高拷贝数的病毒将增加其致病作用的可能性。除提示急性感染外，核酸检测阳性还可能反映急性感染(如人博卡病毒)、潜伏性慢性感染(如部分腺病毒)或无症状急性感染(如人鼻病毒)后的长时间的病毒排毒。

六、核酸检测结果对临床用药指导价值

1、抗菌药物的应用和选择原则

• 若考虑为致病病原体，具体抗菌药物需根据当地耐药监测数据和可及性进行选择。有些病原已经可以通过核酸检测耐药基因/耐药突变的存在，如耐青霉素肺炎链球菌、碳青霉烯类耐药革兰阴性杆菌、耐大环内酯的肺炎支原体/百日咳鲍特菌、耐利福平的结核分枝杆菌等，这些结果对抗菌药物的选择有较好的参考意义，同时也要充分考虑患儿对治疗的实际反应。
• 当病毒核酸检测阳性时，如果患儿出现重症的早期征象、早期抗病毒治疗临床好转后病情再次恶化或应用抗病毒治疗3~5 d仍无好转，应该经验性治疗可能合并的细菌感染，并在治疗的同时行进一步检查。

2、抗呼吸道病毒药物的应用原则

• 儿科医师应尽量明确病毒感染的病原学，严格掌握抗病毒药物的适应证，根据患儿病情轻重及药物本身理化性质，按照5R原则(正确的患者、正确的时间、正确的药物、正确的剂量及正确的给药途径)进行抗病毒治疗。

附表：儿童抗呼吸道病毒药物分类
其他信息：

1、常见呼吸道感染性疾病与病原体

2、不同地区儿童呼吸道感染病原体特征

武汉儿童医院 在 10,206 名患者中发现了一种或多种病原体，肺炎支原体、腺病毒和乙型流感病毒是主要的传染原。共检出2391例病原菌混合感染，其中肺炎支原体是最常见的病原菌。合并感染中最常见的病原体是肺炎支原体和乙型流感病毒。        

其他文献数据：

3、目前已有呼吸道病原体检测试剂类型：

4、已发布的试剂盒指导原则及行业标准：《呼吸道病毒多重核酸检测试剂盒技术指导原则》2019《呼吸道病毒多重核酸检测试剂盒》行业标准 实施时间：2022-12-01.......

信息来源：

[1]儿童呼吸道感染病原体核酸检测专家共识

[2]中国医院协会, 国家儿童医学中心(北京), 国家感染性疾病医疗质量控制中心,等. 抗病毒药物在儿童病毒感染性呼吸道疾病中的合理应用指南[J]. 中华实用儿科临床杂志 2020年35卷19期, 1441-1450页, ISTIC PKU CA, 2020.

[3]《呼吸道病毒多重核酸检测试剂盒》行业标准

[4]《呼吸道病毒多重核酸检测试剂盒技术指导原则》2019

[5]孙宇, 赵林清. 正确分析儿童急性呼吸道感染病毒病原检测结果[J]. 中华实用儿科临床杂志, 2021, 36(24):5.

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